CCK8全称Cell Counting Kit-8试剂,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8[化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正?#21462;?#22240;此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试?#26519;?#35201;用途有:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反?#21462;?#20351;用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。

CCK法应用?#27973;?#24191;泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测?#21462;?/span>

CCK法的操作步骤

实验一:细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5% CO2)。

2、向每?#20934;?#20837;10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光?#21462;?/span>

5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

实验二:细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一?#38382;实?#30340;时间(例如:6、12、24或48小时)。

4、向每?#20934;?#20837;10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光?#21462;?/span>

7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之?#26696;?#25442;新鲜培养基(除去培养基,并?#38376;?#20859;基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。?#27604;?#33647;物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收?#32431;傘?/span>

CCK8检测实验,咨询:谢鹏 15837171623